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      上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

      植物蛋白ELISA试剂盒实验操作步骤

      点击次数:163 发布时间:2021-08-19
        植物蛋白ELISA试剂盒提取实验操作步骤和常见问题有哪些呢?
       
      ELISA试剂盒
             首先我们的清楚:植物蛋白的组成和规格:无色透明的提取试剂50 ml或100 ml。
       
             贮存:4°C,密封避光1年。
       
        用途:提取多种植物组织和细胞的可溶性和疏水性蛋白。如苹果、花生、土豆、烟叶、菠菜、梅花等。
       
        实验具体操作步骤:
       
        1. 组织匀浆,必须充分匀浆,此步骤非常关键:
       
        (1) 冻存组织匀浆:预先将研钵置于-20°C ~-70°C冰箱内冷冻。取液氮冻存的植物组织,放入冰冻的研钵内研磨至粉末状,
       
        注意使组织一直处于冰冻状态,如组织颜色加深或变黑通常表明组织已融化。将研磨好的组织转移到EP 管中,按每200 mg植物
       
        组织加500 ul的比例加提取试剂,混匀后冰上放置20分钟,其间可数次颠倒混匀,以便蛋白溶解。
       
        (2) 新鲜组织匀浆:取新鲜组织放入研钵中,按每200 mg植物组织加500ul的比例加提取试剂,充分研磨使匀浆液中看不到大的
       
        块状或片状组织,保证组织研磨破碎。转移至离心管内,冰上放置20分钟。
       
        2. 离心:12000 g离心15分钟,弃去沉淀。蛋白在上清中。
       
        3. 取离心后的上清,转移至新管,立即使用或-70°C冻存。通常上清内植物色素已基本去除,如有少量残留亦不影响蛋白定量
       
        及电泳实验。建议用BCA方法进蛋白定量(我公司的BCA蛋白定量试剂盒#P1511)。
       
        如进行双向电泳或欲彻底清除色素等杂质可进行以下内骤:
       
        1. 取上清液加入4倍体积的丙酮或甲醇混匀,-20°C至少一小时以充分沉淀蛋白质。
       
        2. 12000 g离心15分钟沉淀蛋白。
       
        3. 弃去上清。自然干燥蛋白沉淀,依据试验将沉淀溶于相应的缓冲液。如进行Western Blot 亦可用提取试剂溶解。
       
        常见问题及解决方法:
       
      ELISA试剂盒
             一. 提取的蛋白量少:
       
        1) 组织蛋白含量较少,如水果等,可增加组织量;
       
        2) 组织匀浆不充分,如纤维较多的组织,破碎较困难,应适当延长匀浆时间;
       
        3) 组织过老或水分丢失致使其干燥,故尽量选用新鲜较嫩的组织;
       
        4) 甲醇或丙酮沉淀后蛋白溶解不充分,应延长溶解时间或使用较强的蛋白溶解剂。
       
        二. 蛋白质量不佳:
       
        1)提取的蛋白有多酚或色素等杂质残留,可重复用丙酮或甲醇沉淀;
       
        2) 蛋白质降解,操作各步骤均应在冰上进行;加入蛋白酶抑制剂。
       
       
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