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      上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

      关于免疫组化你都知道哪些

      点击次数:190 发布时间:2021-08-26
        首先我们得明白免疫组化是什么?免疫组化是指应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技(immunocytochemistry)。今天小编为大家整理了一些一些免疫组化的常见问题,下面我们来看看吧!
       
        1.在什么情况下使用TritonX-100?
       
        (1)Triton X-100 化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚,是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um 厚切片)和免疫细胞化学中一般用Triton X-100作为细胞通透剂,在膜上打孔。
       
        (2)其作用原理:Triton X-100可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,故在细胞免疫组化时尤为推荐使用,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
       
        (3)Triton X-100既是一种表面活性剂,也有抗氧化作用
       
        2.封闭血清的选择原则是什么?
       
        (1)膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体,造成后续结果的假阳性!(2)封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物
       
        自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。
       
        (3)也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。
       
      ELISA.jpg
             3.抗体孵育条件的比较?
       
        (1)一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果→佳;孵育时间:这与温度、抗体浓度有关,一般 37 度 1-2 h,而4度夜和从冰箱拿出后 37 度复温 45 min。
       
        (2)二抗一般室温或 37 度 30 min-1 h,具体时间需要摸索。
       
        4.一抗 4 度孵育后为什么要进行 37 度复温?
       
        (1)一方面,防止切片从 4 度直接放入 PBS 易脱片;
       
        (2)另一方面,使抗原抗体结合更稳定。一般不需要, 但对表达较弱的抗原可能有用,4 度和 37 度时分子运动方式不同, 前者分子碰撞机率和运动速度小于后者, 后者结合更快, 但敏感性也提高了并易造成非特异染色。
       
        (3)其实,我更赞同后一种说法,因为我尝试把肝脏片子从 4 度夜拿出后,直接用 PBS 洗没发生过脱片现象。事实胜于雄辩!
       
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