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      上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

      山羊免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒反应五要素

      点击次数:82 发布时间:2021-10-09
        山羊免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒反应的要素有哪些呢?
       
        参加PCR反应的物质主要可以分为五种即:引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
       
        今天我们重点来讲解下引物:所谓引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
       
      山羊免疫球蛋白M(IgM)
             ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
       
       ?、谝锢┰隹缍龋?以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
       
       ?、垡锛罨篏+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
       
       ?、鼙苊庖锬诓砍鱿侄督峁?,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
       
       ?、菀?'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
       
       ?、抟镏杏谢蚰芗由虾鲜实拿盖形坏?, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
       
       ?、咭锏奶匾煨裕阂镉τ牒怂嵝蛄惺菘獾钠渌蛄形廾飨酝葱?。
       
        引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
       
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